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巴氏菇菌种分离与培养研究

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Agaricus blazei Murrill 菌种分离与培养研究
[摘要] 本文报道了 Agaricus blazei Murrill 子实体形态,母种、原种和栽培种的分离与培养。 关键词:子实体;菌种分离;菌种培养;Agaricus blazei Murrill

Agaricus blazei Murrill 是一种珍稀食用药用真菌,原产巴西及秘鲁。分类学上属担子菌亚 门 (Basidiomycotina) , 层菌纲 (Hymenomycetes) , 伞菌目 (Agaricales) , 伞菌科 (Agaricaceae) , 伞菌属(Agaricus)

1 形态概述
子实体外部形态如图 1 所示。菌盖呈半球形,类似馒头状,开伞后*展。菌盖中央部分 微突或*坦,表面被有纤维的淡黄或浅黄褐色鳞片,有时在边缘有菌幕的碎片。菌盖中央部 分肉厚, 一般在 10cm 左右, 而边缘则较薄。 菌肉先为白色, 后为黄白色。 菌盖直径一般 5-9cm 者居多,其表面不光滑。 菌褶离生,极密集,先为白色或乳白色,后为土黄或浅黄褐色。 菌柄呈柱状。基部略有膨大,初为白色,后为乳白色,高度为 5-10cm 左右。 孢子呈卵圆形或椭圆形,褐色或深褐色,见图 2。菌盖菌丝呈*行状,见图 3。

2 材料与方法
2.1 母种分离培养 孢子分离法 以下操作均在无菌室中进行,所用器皿等均经无菌处理。拿取个体优良,特征典型,无 病虫害,且菌盖含苞待放,但尚没开伞,处于菇蕾期的子实体,用 75%乙醇棉擦拭菌盖与 菌柄。将子实体按自然生长状态固定后,放在大口径*皿上方。*皿是收集孢子的容器,其 下面放一张白纸,以便清晰观察孢子弹射情况。据观察,一般在 3d 后孢子开始弹射。新孢 子萌发快,而放在冰箱中保存的孢子萌发慢。为此,即刻准备 10 支试管,第一支装 10ml 无菌水其余的装 9ml 无菌水。用无菌牙签挑少许孢子放入装 10ml 无菌水的试管中,充分振 荡,使孢子均匀分散。再用无菌吸管取 1ml 孢子液放入第一支装 9ml 无菌水的试管中,充 分摇匀后, 从中取 1ml 放入第二支含 9ml 无菌水试管中,充分摇匀,以次类推,直到在低倍显微 镜下检查一个视野中仅有 1-2 个孢子为止。 然后用无菌注射器在最后一个稀释液中吸取孢子 液,滴在斜面培养基上或*板上。均匀涂抹,每支试管或*皿 1-2 滴,使孢子液缓缓流下, 涂抹均匀后,25℃培养。 组织分离法: 在无菌室操作,所用器皿等均经无菌处理。具体操作是,如孢子分离法对子实体的要求 标准, 用解剖刀在菌柄中部纵切少许, 用手掰开, 取菌盖组织一小块, 分别放到*皿中, 25℃ 培养,切记,用刀切时千万不要碰菌褶,一碰就会有孢子弹出,那就不是组织分离了。 培养基组成 yeast extract 3g malt extract 3g peptone 5g Glucose 10g Agar 20g Distilled Water 1000ml 2.2 原种分离培养 经孢子分离法或组织分离法所得到的母种, 在培养过程中, 要经常观察其菌落生长情况。

例如在一周内就出现菌落,大多为杂菌,应即时除掉。培养到 2-3 周,当见到星芒状菌落时 要及时挑出, 移到新的原种培养基上。 在我们的操作中是将*皿或试管中生长良好的菌落用 接种针挑出,接到经灭菌的装有液体培养基的试管中,25℃振荡培养,约需 2—3 周即可。 培养基组成 yeast extract 3g malt extract 3g peptone 5g Glucose 10g Distilled Water 1000ml 2.3 栽培种分离培养 栽培种分离培养可用小麦或大麦作培养基。 栽培种分离培养所用麦粒的用量依栽培面积 大小而增减。所用麦粒要子粒饱满,无杂质,无病虫害。可取 10kg 小麦,洗净,加水 15kg 左右,达沸点后保持 15min,熄火后麦粒在沸水中保持 15min,沥净水,将麦粒摊开,晾干 表面水分后装瓶,120℃2h 灭菌,冷却后取出并接种,25℃培养 2-3 周。培养期间仍要经常 检查有无杂菌污染,若有即除之。同时要适当摇动菌种瓶,让麦粒松动,以使上下层菌种生 长发育速度较为均匀。 这样得到的栽培种, 可以接到粪草培养基上进行栽培生产。 如何栽培, 另文论述。

3 结果与讨论
3.1 上述菌种分离培养方法是成功的。 众所周知,Agaricus blazei Murrill 是一种珍稀菇类,对生态环境要求比较苛刻。在菌种 分离培养阶段,往往遇到许多困难,有时竟莫名其妙的不长菌,分离培养不出菌种来。如同 基因工程操作中,反转录试验,道理挺简单,操作也不复杂,但在 80 年代,许多研究者竟 屡屡作不出来。本人作菌种工作多年,在实践中也遇到不少挫折与失败。本文的论述是把作 成功的部分写出来,供同仁参考。 3.2 原种分离培养采用液体培养基较宜。 在大面积栽培时,易于操作,便于操作是很重要的,可以提高生产率,减少污染。用试 管液体培养基培养原种, 在往栽培种培养基(麦粒) 上接种时, 可一管接一瓶, 很便捷利索。 在操作上较固体培养基简便得多。 3.3 栽培种分离培养时用麦粒作培养基便于往粪草培养基上接种。 在大面积工厂化生产时,用非麦粒培养基接种培养料很不方便,不易均匀。而麦粒状, 易取出,接种时易均匀分布,有利于均衡发菌,提高产量。 3.4 在栽培种麦粒培养基中加与不加石膏与碳酸钙均可 从我们的试验中得知, 往麦粒中加与不加石膏和碳酸钙无明显区别。 加也没发现有什么 长处,故而弃之。从而简化操作,降低成本。




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